Annales de Biologie Clinique
MENULa RT‐PCR en diagnostic clinique Volume 61, numéro 6, Novembre-Décembre 2003
Illustrations
- Mots-clés : transcription inverse, RT‐PCR, ARN, hexanucléotide, oligodT
- Page(s) : 635-44
- Année de parution : 2003
Le domaine d‘application de la RT‐PCR (reverse transcription‐polymerase chain reaction) pour le diagnostic clinique comprend l‘étude de la charge virale des virus ARN, et l‘analyse du produit de l‘expression des gènes. La RT‐PCR est également souvent utilisée pour faciliter le séquençage de grands gènes. On assiste actuellement à un élargissement majeur du champ d‘application de cette technique suite au développement des approches quantitatives par PCR en temps réel. La transcription inverse est cependant une réaction délicate du fait d‘une part, de sa faible reproductibilité et, d‘autre part, de la fragilité de l‘ARN et de sa contamination fréquente par de l‘ADN. Il faudra aussi dans certains cas obtenir une amplification spécifique dans un milieu où des séquences homologues peuvent être présentes en quantités très largement supérieures à celles de la séquence d‘intérêt. Tout ceci impose d‘adopter des précautions particulières dans la mise en œuvre expérimentale de la RT‐PCR, dans le choix des amorces de PCR, et dans l‘utilisation de standards internes ou externes. Cette revue a pour objectif de faire la synthèse des différents paramètres importants pour aider à la mise en œuvre d‘une réaction de RT‐PCR et pour adapter la stratégie de transcription inverse à l‘objectif poursuivi.